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O型口蹄疫抗体检测试剂盒(竞争ELISA)

产品编号:100708

检测方法:Elisa试验

检测样品:血清或血浆

规格:96T/192T


  

O型口蹄疫抗体检测试剂盒(竞争ELISA)




口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus, FMDV)抗体检测试剂盒用于检测猪、牛、羊血清中的O型口蹄疫病毒抗体,用于评估口蹄疫苗免疫状况。

本试剂盒采用竞争ELISA法,在酶标板条微孔上预包被口蹄疫病毒抗原。在试验中,加入稀释后的待检血清,经过温育后,若样品中含有口蹄疫病毒抗原特异性抗体,则与包被板上的抗原结合,经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后;再加入酶标的抗VP1单抗,样本中的抗体阻断了单抗与包被板上抗原的结合;经洗涤除去未结合的酶结合物;在微孔中加入TMB底物液,经酶催化产生的蓝色信号与样本中的抗体含量成反比,加入终止液终止反应后,用酶标仪450nm波长测定反应孔中的吸光度A值。

 

组份

1

抗原预包被板条

1/2

6

终止液

6/11ml

2

酶结合物

11/22ml

7

阴性对照

1/2ml

3

10倍浓缩洗涤液

50/100ml

8

阳性对照

0.5ml/1ml

4

显色液

11/22ml

9

封板膜

2/4

5

样本稀释液

100ml

10

说明书

1

 

自备的设备及试剂

1. 微量移液器:10µl-100µl100µl-1000µl

2. 一次性移液器吸头。

3. 量筒:500ml

4. 96孔板酶标仪。

5. 蒸馏水或去离子水。

6. 洗瓶或洗板机。

 

样品制备

取动物全血,按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血。

洗涤液的准备

浓缩洗涤液使用前应恢复至室温,如有盐结晶,摇动使结晶的盐溶解,然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。

 

注意事项

1. 试剂盒使用前各试剂应平衡至室温,应将试剂盒各组份放置室温至少1小时以上。使用前应摇匀,使用后放回2-8℃

2. 不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用,使用试剂时应防止试剂污染。

3. 底物和终止液对皮肤和眼可能有刺激性,使用时应该注意防护。

4. TMB(显色液)不要暴露于强光和避免接触氧化剂。

5. 检测板拆封后应避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中,并尽快置于2-8℃)

6. 所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。

7. 严格遵守操作说明可以获得最好的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精确。

8. 抗原包被板为一次性用品,不得重复使用;

 

操作步骤

1. 每次试验均设置阳性对照1孔、阴性对照2孔,阴、阳性对照不用稀释,直接取100ul加入反应孔。

2. 将样品稀释液按80ul/孔加入到微孔反应板内,之后将待检样品血清按20ul/孔加入孔内并吹打混匀(移液器枪头请勿混用);

3. 盖上封板膜(可按实际需要自行裁剪),置37℃温育60分钟。

4. 小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,使用工作浓度洗涤液每孔加250ul,后甩去孔内液体,以上步骤重复4-6次,最后在干净吸水纸上拍干。

5. 每孔加酶结合物100μl,盖上封板膜,置37℃温育60分钟。

 

1. 小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,洗涤4-6, 方法同4。切记最后在干净吸水纸上拍干。

2. 每孔加显色液100µl,混匀、盖上封板膜37℃闭光显色15分钟。

3. 每孔加终止液50μl,使反应终止,10分钟内测定结果。

 

结果判定

用酶标仪于450nm630nm作参比波长)读取吸光度OD值。

试验成立的条件是:

阴性对照(N)OD>0.5,同时阳性对照(P)阻断率>50%

计算方法:

PI (阻断率)=  1 —(样品OD÷ 阴性OD均值)

阴阳性判断:

牛、羊样本

PI(阻断率)>45%则判断为阳性;

PI≤45%则判断为阴性。

猪样本

PI(阻断率)>35%则判断为阳性;

PI≤35%则判断为阴性。

 

 

贮存方法 2 - 8ºC下贮存。

有效期 12个月。

 


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