亚博平台app

非洲猪瘟病毒微流控快速荧光PCR检测试剂盒

产品编号:AP0002

检测方法:实时荧光PCR

检测样品:多样品

规格:40T


  

非洲猪瘟病毒微流控快速荧光PCR检测试剂盒




非洲猪瘟病毒微流控荧光PCR快速检测试剂盒

LabChip Ultra Fast Fluorescence PCR Detection Kit for African Swine Fever Virus



【预期用途】

非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起猪的一种急性、热性、高度接触性动物传染病,临床上以高热、网状内皮系统出血和高死亡率为特征,易感猪群的病死率高达100%。我国将其列为一类动物疫病,世界动物卫生组织(OIE)将其列为法定报告动物疫病,并且列入《禁止生物武器公约》核查动物病原体清单。

本试剂盒用于对样品中的非洲猪瘟 DNA 进行快速定性检测,可用于该病毒感染的实验室诊断和现场检测。检测结果仅供临床参考,不能单独作为确诊或排除病例的依据。实验操作人员应接受过基因扩增或分子生物学方法检测的专业培训,具备相关的实验操作资格。

【检测原理】

本试剂盒利用实时荧光PCR技术,以非洲猪瘟病毒基因组的高度保守区为靶区域,设计特异性引物及探针,探针标记FAM荧光素,配以Taq DNA 聚合酶等成分,使用配套的极速荧光PCR设备进行 PCR扩增,从而对样品中非洲猪瘟病毒DNA 进行快速定性检测。

【主要组成成份】

试剂名称

规格

样本处理液A

1300µl×1

样本处理液B

1300µl×1

DNA聚合酶

20μL×1

PCR反应液

280μL×1

阴性对照

200μL×1

阳性对照

200μL×1

注:不同批号试剂盒的成份不可以互换使用。

【包装规格】

40头份/

【储存条件及有效期】

试剂于-20℃储存;反复冻融不超过 5 次;有效期12个月。

【适用仪器】

ZR-LC16/ V280 / UF-150型微流控极速荧光定量PCR仪。

【样品要求】

1.适用标本类型:血液、组织、血粉、饲料等。

2.标本采集与处理

1)血液样品:用EDTA抗凝采血管采集血液,充分混匀,编号备用。

2)组织样品:用无菌剪刀和镊子剪取病死或剖杀猪主要脏器(淋巴结、脾脏、扁桃体)约2g,加入10倍体积PBS或生理盐水,于研钵或组织匀浆器中充分研磨后转入1.5 mL离心管中编号备用。

3)血粉:同上处理,只不过省掉研磨步骤。

4)饲料等其它样品:参照专用的商品化提取试剂盒的说明书操作。

3.样本的储存

样品可立即用于检测,如不能立即检测,在 4℃保存不超过 24 小时,-20℃保存不超过3个月,-70℃可长期保存,反复冻融不超过 5 次。

【检测方法】

一、病毒DNA的提取

1)待检样品份数总和用n表示 ,取n个灭菌的离心管,逐管编号。

2)每管加入处理液A 30µl

3)每管分别加入已处理的待检样品3µl,充分混匀,18-25℃处理5分钟,旋涡震荡30秒。

4)每管加入处理液B 30µl,震荡混匀,待检。

5)处理后的样本如在2小时内进行下一步试验,请于4℃保存,如不能立即进行下一步试验,请于-20℃保存。

备注:饲料等其它样品,此步骤同样参照专用的商品化提取试剂盒的说明书操作。

二、PCR试剂配置(在试剂准备区进行)及加样(在样品处理区进行)。

1. 在试剂准备区,按下列组成配制PCR 混合液(n为待测样本数+1阳性对照+1阴性对照):

试剂名称

n份用量(10µl体系)

PCR反应液

7µl×n

DNA聚合酶

0.5×n

(注意:使用前确保PCR反应液和DNA聚合酶充分融化)

2. PCR混合液按7µl/ 分装至PCR反应管中,并移至样品处理区。

3. 用带滤芯的吸嘴分别取已处理好的样品、阴性对照、阳性对照各3μl分别加到装有 PCR混合液的反应管中漩涡混匀、瞬时离心。

4. 使用UF-150型号的仪器,各取 10µl 加入PCR 扩增芯片中,盖上芯片膜,移至扩增检测区。

使用V280ZR-LC16型号的仪器,各取 8µl 加入PCR 扩增芯片中,盖上芯片盖,移至扩增检测区。

三、PCR扩增检测(在扩增检测区进行)

1. PCR 芯片插入微流控极速荧光定量PCR仪中进行扩增检测。

 

 

2. 循环参数设定:

 

循环数

  ()

  (min:sec)

收集荧光

信号

1

1

95

01:00

2

40

95

00:07

60

00:14

3. 仪器检测通道选择:荧光信号选择FAM 通道。

四、质控标准

1. 阴性对照:结果为阴性。

2. 阳性对照:结果为阳性,阳性对照 Ct ≤33

3. 以上两项需在一次实验中同时满足,否则,本次实验无效,实验应重新进行。

五、结果分析

1. 实验结束后,根据相关仪器的软件进行分析,调节噪声容限至基线噪声以上,使阴性对照 Ct 值不出现任何数值。

2. 阈值设定原则以阈值线刚好超过正常阴性对照曲线(无规则的噪音线)的最高点为准。

3. 记录仪器自动分析计算出的样品 Ct 值。

【临界值】本试剂盒的临界值为Ct= 38

【检测结果的解释】

1. 每次实验均需将试剂盒内的阴性对照、阳性对照与待检样品一同检测,检测结果应符合其性能指标,否则本次实验无效。

2. 实验结果判断方法

2.1阴性结果判定:如果样品在 FAM 通道扩增曲线均不呈 S 型、Ct 值为 UNDET 或者>38.00

2.2.阳性结果判定:如果样品在 FAM 通道扩增曲线呈型且Ct ≤38,则结果为阳性。

3. 在质控正常的前提下,实验结果判读模式

3.1阳性样品报告格式为:样品检测到非洲猪瘟病毒DNA,浓度高于试剂盒的检测限;

3.2阴性样品报告格式为:样品未检测到非洲猪瘟病毒DNA,浓度低于试剂盒的检测限。

 


业务咨询
技术咨询
yb亚博网站_亚博vip手机网页版 欧宝app下载_欧宝体育官网在线入口_官方最新版
oe欧亿平台登录-欧亿体育官网app下载
tb天博体育登录入口-天博体育APP官网下载
亚盈体育app官网下载_亚盈APP下载安装最新版本
鸭脖娱乐网站入口_欢迎来到鸭脖娱乐
欧宝体育APP下载-官方下载