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H7亚型禽流感抗体检测试剂盒 (竞争ELISA,鸡、鸭、鹅等禽类通用)




产品编号:


检测方法:竞争ELisa


检测样品:血清


规格:96T/192T





  

H7亚型禽流感抗体检测试剂盒 (竞争ELISA,鸡、鸭、鹅等禽类通用)




介绍

H7亚型禽流感抗体检测试剂盒检测家禽、野禽等动物血清中的H7亚型禽流感抗体,用于评估禽流感疫苗免疫状况及感染禽类的血清学辅助诊断。

本试剂盒采用竞争ELISA法,在酶标板条微孔上预包被H7抗原,运用抗单克隆抗体与血清中的抗体竞争固相载体中的结合位点,从而间接检测血清中的抗H7抗体。在试验中,加入待检血清及抗单克隆抗体,经过温育后,若样品中含有H7病毒特异性抗体,则与包被板上的抗原结合,从而阻碍了单抗与抗原的结合,经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后,再加入抗小鼠酶标二抗,与检测板上的抗原抗体复合物发生特异性结合,再经洗涤除去未结合的酶结合物;在微孔中加入TMB底物显色,样本的吸光度值与其所含有的抗体的含量成负相关,从而达到检测样品中抗体的目的。

 

组份

1

抗原预包被板条

1/2

7

样本稀释液

20ml

2

酶结合物

11/21ml

8

阴性对照

200µl

3

单抗工作液

7/14ml

9

阳性对照

200µl

4

10倍浓缩洗涤液

100ml

10

封板膜

2/4

5

显色液

11/21ml

11

说明书

1

6

终止液

15ml




需自备的设备及试剂

1. 微量移液器: 0.5µl-10µl10µl-100µl100µl-1000µl

2. 一次性移液器吸头。

3. 量筒:500ml

4. 96孔板酶标仪。

5. 蒸馏水或去离子水。

6. 洗瓶或洗板机。

样品制备

取动物全血,按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血。

洗涤液的准备

浓缩洗涤液使用前应恢复至室温,如有盐结晶,摇动使结晶的盐溶解,然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。

注意事项

1. 试剂盒使用前各试剂应平衡至室温,使用前应摇匀,使用后放回2-8℃。

2. 不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用,使用试剂时应防止试剂污染。

3. 显色液和终止液对皮肤和眼可能有刺激性,使用时应该注意防护。

4. 显色液不要暴露于强光和避免接触氧化剂。

5. 检测板拆封后应避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中,并尽快置于2-8)

6. 所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。

7. 严格遵守操作说明可以获得最好的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精确。

操作步骤

1. 取预包被的检测板(根据样品多少,可拆开分次使用),待检验板条每孔均需加入样本稀释液40ul,然后将待检血清10μl加入检测板,同时设阴性2孔和阳性对照1孔,取阴性及阳性对照各10μl分别加入反应孔中;

2. 在样本以及阴阳性对照混匀后,每孔加入50μl单抗工作液。轻轻振匀孔中样品(勿溢出)。

3. 盖上封板膜,置37℃温育60分钟。

4. 小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,用洗涤液洗6次。每次用洗涤液注满板孔(约250μl),且每次需将洗涤液甩干。洗涤6次后在干净吸水纸上拍干。

5. 每孔加酶结合物100μl,盖上封板膜,置37℃温育30分钟。

6. 小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,洗涤6方法同4。切记最后在干净吸水纸上拍干。

7. 每孔显色液100ul,盖上封板膜37℃闭光显色15分钟。

8. 每孔加终止液50μl,使反应终止,10分钟内测定结果。

结果判定

用酶标仪于450nm630nm作参比波长)读取吸光度OD值。

试验成立的条件是:

阴性对照(NOD均值>0.5

阳性对照(POD/阴性对照(NOD均值 < 0.4

计算方法:

样品OD/阴性对照OD均值=S/N值。

阴阳性判断:

S/N≥0.35则判断为阴性;

S/N<0.35则判断为阳性。

有效期

贮存方法: 2 - 8ºC下贮存。

有效期: 12个月。

 


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