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H5亚型禽流感抗体检测试剂盒(阻断ELISA)




产品编号:


检测方法:


检测样品:


规格:




  

H5亚型禽流感抗体检测试剂盒(阻断ELISA)




介绍

H5亚型禽流感抗体检测试剂盒检测家禽、野禽等动物血清中的H5亚型禽流感抗体,用于评估禽流感疫苗免疫状况及感染禽类的血清学辅助诊断。

本试剂盒采用阻断ELISA法,在酶标板条微孔上预包被H5抗原,运用抗单克隆抗体与血清中的抗体竞争固相载体中的结合位点,从而间接检测血清中的抗H5抗体。在实验中,加入稀释后的待检血清,经过温育后,若样品中含有H5抗原特异性抗体,则与包被板上的抗原结合,经洗涤除去未结合的抗体和其它成分后,再加入酶标的抗H5抗体,样本中的抗体阻断了酶标抗体与包被板上抗原的结合,经洗涤除去未结合的酶结合物,在微孔中加入TMB底物液,经酶催化产生的蓝色信号与样本中的抗体含量成反比,加入终止液终止反应后,用酶标仪450nm波长测定反应孔中的吸光度A值。

 

组份

1

抗原预包被板条

1/2

6

终止液

15ml

2

酶结合物

11/22ml

7

阴性对照

2ml

3

10倍浓缩洗涤液

100ml

8

阳性对照

1ml

4

显色液

11/22ml

9

封板膜

2/4

5

样本稀释液

100ml

10

说明书

1

需自备的设备及试剂

1.    微量移液器:10µl-100µl100µl-1000µl

2.    一次性移液器吸头。

3.    量筒:500ml

4.    96孔板酶标仪。

5.    蒸馏水或去离子水。

6.    洗瓶或洗板机。

 

样品制备

取动物全血,按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血。

 

洗涤液的准备

浓缩洗涤液使用前应恢复至室温,如有盐结晶,摇动使结晶的盐溶解,然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。

 

注意事项

1.    试剂盒使用前各试剂应平衡至室温,应将试剂盒各组份放置室温至少1小时以上。使用前应摇匀,使用后放回2-8℃。

2.    不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用,使用试剂时应防止试剂污染。

3.    终止液对皮肤和眼可能有刺激性,使用时应该注意防护。

4.    TMB(显色液)不要暴露于强光和避免接触氧化剂。

5.    检测板拆封后应避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中,并尽快置于2-8)

6.    所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。

7.    严格遵守操作说明可以获得最好的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精确。

8.         抗原包被板为一次性用品,不得重复使用。

 

操作步骤

1.    每次试验均设置阳性对照1孔、阴性对照2孔,阴、阳性对照不用稀释,直接取100ul加入反应孔。

2.    将样品稀释液按50ul/孔加入到微孔反应板内,之后将待检样品血清按50ul/孔加入孔内并吹打混匀(移液器枪头请勿混用);

3.    盖上封板膜(可按实际需要自行裁剪),置37℃温育120分钟。

4.    小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,使用工作浓度洗涤液每孔加250ul,后甩去孔内液体,以上步骤重复6次,最后在干净吸水纸上拍干。

5.    每孔加酶结合物100μl,盖上封板膜,置37℃温育30分钟。

6.    小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,洗涤6方法同4。切记最后在干净吸水纸上拍干。

7.    每孔加显色液100µl,混匀,盖上封板膜37℃闭光显色

15分钟。

8.    每孔加终止液50μl,使反应终止,10分钟内测定结果。

 

结果判定

用酶标仪于450nm630nm作参比波长)读取吸光度OD值。

试验成立的条件是:

阴性对照(NOD均值>0.4

阳性对照(POD/阴性对照(NOD均值 < 0.4

计算方法:

样品OD/阴性对照OD均值=S/N值。

阴阳性判断:

S/N≥0.55则判断为阴性;

S/N<0.55则判断为阳性。

有效期

贮存方法: 2 - 8ºC下贮存。

有效期: 12个月。


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